上海雅吉生物公司代理銷售ATCC來(lái)源，sciencell來(lái)源，上海細(xì)胞庫(kù)來(lái)源等細(xì)胞銷售，另我公司有自建細(xì)胞庫(kù)，生產(chǎn)培養(yǎng)各類細(xì)胞系，采用灌注法制備各種原代細(xì)胞。

基因敲除細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)：助力精準(zhǔn)探索與技術(shù)創(chuàng)新 

隨著基因組學(xué)和分子生物學(xué)的快速發(fā)展，基因敲除技術(shù)已成為探索基因功能、研究疾病機(jī)制和開發(fā)新藥的重要工具?；蚯贸?xì)胞系作為該技術(shù)的核心產(chǎn)品之一，廣泛應(yīng)用于學(xué)術(shù)研究、藥物篩選及疾病模型的構(gòu)建等領(lǐng)域。今天就為大家分享一下基因敲除細(xì)胞系構(gòu)建流程。

基因敲除常用于研究基因在細(xì)胞功能中的作用。下面是常用的基因敲除細(xì)胞系構(gòu)建方法和步驟：

 插入突變（Knock-in）：通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)將外源DNA片段插入至目標(biāo)基因位點(diǎn)，使目標(biāo)基因發(fā)生突變而實(shí)現(xiàn)基因敲除的目的。這個(gè)過(guò)程通常需要克隆目標(biāo)基因的編碼序列，并將突變（例如終止密碼子）或熒光標(biāo)記等片段插入其中。

 CRISPR/Cas9敲除：利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)，設(shè)計(jì)合成質(zhì)粒（sgRNA和Cas9蛋白），導(dǎo)入靶向基因組并誘導(dǎo)DNA雙鏈斷裂。通過(guò)細(xì)胞自我修復(fù)機(jī)制（非同源末端連接或同源重組），實(shí)現(xiàn)對(duì)靶向基因的敲除。

基因敲除細(xì)胞株核心優(yōu)勢(shì)

1 高效基因編輯：雙sgRNA策略，敲除效率>90%

2多癌種覆蓋：18種標(biāo)準(zhǔn)化腫瘤細(xì)胞模型（下表）

3 嚴(yán)格質(zhì)控：STR鑒定、支原體檢測(cè)、測(cè)序驗(yàn)證

 4快速交付：現(xiàn)貨細(xì)胞5個(gè)工作日內(nèi)發(fā)貨，定制服務(wù)6-8周

技術(shù)參數(shù)

參數(shù)規(guī)格

驗(yàn)證方法Sanger測(cè)序 + Western Blot

敲除效率>90%（測(cè)序驗(yàn)證）

脫靶率<0.1%（全基因組脫靶分析）

傳代穩(wěn)定性≥15代（基因型穩(wěn)定）

基因敲除細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1.細(xì)胞選擇：優(yōu)先使用 腫瘤細(xì)胞系（如HEK293、HepG2），永生細(xì)胞系可能因高拷貝數(shù)導(dǎo)致敲除困難。

2.驗(yàn)證方法：基因組水平：PCR擴(kuò)增靶位點(diǎn)+Sanger測(cè)序。

3.蛋白水平：Western Blot檢測(cè)SDK1蛋白是否缺失（需選擇大片段敲除避免假陰性）。支原體檢測(cè)：避免污染影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。